ADN-Bleu de toluidine
La gélose à ADN au bleu de toluidine est utilisée pour déterminer la présence d'une activité nucléase chez un micro-organisme.
Catégories :
Milieu de culture - Bactériologie
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La gélose à ADN au bleu de toluidine est utilisée pour déterminer la présence d'une activité nucléase chez un micro-organisme.
En routine, on l'utilise pour identifier l'expression d'une DNAse thermorésistante (ou thermonucléase) caractéristique de l'espèce Staphylococcus aureus.
Usage
Recherche de la DNAse thermorésistante de Staphylococcus (Microbiologie alimentaire et médicale)
Préparation
Milieu prêt à l'emploi. Il est envisageable de la fabriquer à partir des constituants de base.
Recherche de la DNAse thermostable ou Thermonucléase
La DNAse thermostable est une enzyme qui résiste a la chaleur (100 °C pendant 15 minutes) et qui dégrade l'ADN selon la réaction :
Technique
Ensemencer un bouillon cœur-cervelle pendant 24 heures à 37 °C avec la souche à étudier.
En placer, une partie 15 min au bain-marie (100 °C) et conserver le reste.
Percer la gélose de 3 trous. Inoculer quelques gouttes :
- De bouillon stérile dans le premier puits. (contrôle négatif)
- De bouillon chauffé le second puits.
- De bouillon non chauffé dans le troisième. (facultatif - contrôle positif)
Incuber 4 heures à 37 °C.
Remarques : bien noter le contenu de chaque puits au dos de la boîte de Petri. Limiter à 3 gouttes de bouillon pour ne pas faire déborder les puits. Incuber la gélose sans retourner la boîte !
Lecture
L'observation d'un éventuel halo rose signe la présence d'une DNAse autour des trous percés sur le fond bleu de la gélose.
- Puits témoin : contenant du bouillon cœur cervelle stérile
- Puits contenant du milieu cœur cervelle avec la souche a étudier
- Puits contenant du milieu cœur cervelle ensemencé puis chauffé a 100 °C pendant 10 minutes
- Si le puits 1 devient rose, le test est à recommencer.
- Si le puits 2 devient rose et que le puits 3 reste bleu, la souche possède une DNase non thermostable.
- Si les puits 2 et 3 sont roses, la souche possede une DNase thermostable.
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