ADN-Bleu de toluidine

La gélose à ADN au bleu de toluidine est utilisée pour déterminer la présence d'une activité nucléase chez un micro-organisme.



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Milieu de culture - Bactériologie

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  • Test réalisé en boîte de Pétri contenant un milieu avec ADN et bleu de toluidine. Chauffer 15 min à 100°C une culture de 24h en bouillon cœur-cervelle du ... (source : christelle.larcher.free)
  • sélection des puits positifs dilution "loi de poisson".... substances d'enrichissements du bouillon cœur cervelle...... Détection immunologique de la DNase thermostable : test d'inhibition en gélose.... En présence de bleu de toluidine et d'ADN dans la gélose, une activité nucléasique provoque la formation d'un... (source : scribd)

La gélose à ADN au bleu de toluidine est utilisée pour déterminer la présence d'une activité nucléase chez un micro-organisme.

En routine, on l'utilise pour identifier l'expression d'une DNAse thermorésistante (ou thermonucléase) caractéristique de l'espèce Staphylococcus aureus.

Usage

Recherche de la DNAse thermorésistante de Staphylococcus (Microbiologie alimentaire et médicale)

Préparation

Milieu prêt à l'emploi. Il est envisageable de la fabriquer à partir des constituants de base.


Recherche de la DNAse thermostable ou Thermonucléase

La DNAse thermostable est une enzyme qui résiste a la chaleur (100 °C pendant 15 minutes) et qui dégrade l'ADN selon la réaction :

ADN \longrightarrow Nucl\acute e tides\ ou\ polynulc\acute e otides.

Technique

Ensemencer un bouillon cœur-cervelle pendant 24 heures à 37 °C avec la souche à étudier.

En placer, une partie 15 min au bain-marie (100 °C) et conserver le reste.

Percer la gélose de 3 trous. Inoculer quelques gouttes :

Incuber 4 heures à 37 °C.

Remarques : bien noter le contenu de chaque puits au dos de la boîte de Petri. Limiter à 3 gouttes de bouillon pour ne pas faire déborder les puits. Incuber la gélose sans retourner la boîte !

Lecture

résultats du test avec Staphylococcus aureus possédant une thermonucléase.

L'observation d'un éventuel halo rose signe la présence d'une DNAse autour des trous percés sur le fond bleu de la gélose.


  1. Puits témoin : contenant du bouillon cœur cervelle stérile
  2. Puits contenant du milieu cœur cervelle avec la souche a étudier
  3. Puits contenant du milieu cœur cervelle ensemencé puis chauffé a 100 °C pendant 10 minutes

Voir aussi

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